实验4 细胞融合.ppt
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1、实验4 细胞融合 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望 杂交的目的杂交的目的-制备单克隆抗体制备单克隆抗体 杂杂交瘤技交瘤技术术的基本原理的基本原理 具有分泌功能的具有分泌功能的B细胞难以在体外长期存活。利用细细胞难以在体外长期存活。利用细胞融合技术,将免疫后的胞融合技术,将免疫后的B细胞与在体外能长期存活的细胞与在体外能长期存活的骨髓瘤细胞进行融合,经过选择培养获取杂交细胞,骨髓瘤细胞进行融合,经过选择培养获取杂交细胞,这种细胞称为杂交瘤细胞(这种细胞
2、称为杂交瘤细胞(Hybridoma)。)。:该细胞的特点:该细胞的特点:1 1、具有免疫、具有免疫B淋巴细胞分泌特异性淋巴细胞分泌特异性mAb的功能;的功能;2 2、具有骨髓瘤细胞无限增殖的能力。故应用杂交瘤、具有骨髓瘤细胞无限增殖的能力。故应用杂交瘤 细胞生产单克隆抗体。细胞生产单克隆抗体。杂交瘤技术基本过程示意图杂交瘤技术基本过程示意图 HATHAT选择性培养选择性培养 HATHAT分别代表次黄嘌呤(分别代表次黄嘌呤(hypoxanthinehypoxanthine,H H)氨基碟呤)氨基碟呤(aminopterinaminopterin,A A)和胸腺嘧啶()和胸腺嘧啶(thymidin
3、e,Tthymidine,T)三)三种物质种物质。细胞的细胞的DNA生物合成有两条途径:生物合成有两条途径:Choice of animalThe mouse is usually the animal of choice.Suitable mouse myeloma cell lines are widely available,and grown of hybridomas in mice is usually no problem.All of the currently available mouse myeloma lines,which are suitable for fusio
4、n,are of BALB/C origin,6-8 week,female mouse is usually used .Choice of myeloma cell 1.NS-1,has been very widely used for hybridoma production.When cultured alone,it synthesizes light chains.2.X63 and Sp2/0 are the current lines for fusion.Sp2/0 hybridoma appear to be somewhat more Sensitive than NS
5、-1 to environmental conditions.Fusing agent All current hybridoma work uses polyethylene glycol(PEG)as the fusing agent.The exact molecular weight PEG seems to be unimportant.Most investigators have used PEG of molecular weight 500-6000.Note that the number assigned to PEG does not necessarily indic
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