血清丙氨酸氨基转移酶.ppt
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1、血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活力的测定方法:改良赖氏法改良赖氏法 组员:组员:魏青宇魏青宇 何彩云何彩云 肖磊肖磊 柯艾青柯艾青【目的要求】1.了解血清ALT活力单位的定义。2.掌握血清ALT活性测定的方法及临床意义。血清酶活力测定的临床意义原理:正常情况下,血清中各种酶含量稳定,病理情况下则反之。如:许多组织器官的疾病表现为血清酶活力的异常。通过血清酶活力的测定可以作为器官,组织疾病及恶性肿瘤的临床诊断。造成血清酶活力异常的原因有:(1)细胞酶及细胞标志酶的释放入血液 (2)酶的合成增强 (3)酶清除受阻(4)器官功能损伤 详见p54实例说明实例说明:ALT测定的临床意义ALT广泛存在于机
2、体的各种组织中,但在肝细胞中含量最多。当肝脏有病变时特别是急性肝炎及肝细胞坏死时,血清中ALT活力显著升高。在肝癌,肝硬变及胆道疾病时,此酶活力也可中度或轻度增高。另外,其他脏器或组织疾病,该酶活力也升高。how?知识回顾知识回顾:血清中碱性磷酸酶(ALP)活力的测定(磷酸苯二钠法)ALP磷酸苯二钠+H2O 苯酚+磷酸氢二钠 pH=10 酶促反应苯酚+4-氨基安替比林 铁氰化钾 红色醌亚胺衍生物 显色反应碱性磷酸酶活力的测定的方法(碱性磷酸酶活力的测定的方法(标准对照法标准对照法)(2)本次实验的方法:本次实验的方法:改良赖氏法卡门氏法酶活力单位:1ml血清(反应总量为3ml)在25,340n
3、m,内径为1cm的比色皿,1分钟,A下降0.001的酶量赖氏法:ALT丙氨酸+-酮戊二酸 谷氨酸+丙酮酸丙酮酸+2,4二硝基苯肼 OH-丙酮酸-2,4-二硝基苯腙,改良赖氏法改良赖氏法本实验卡门氏法测ALT活力的方法为什么被赖氏法取代?他们各自的测定原理,说明两种方法的区别与联系?答:答:由于NADH在波长340nm处有特异吸收峰,因此ALT的活性可通过NADH(反应物)(反应物)的减少的减少量,亦即通过340nm吸光度的减少量间接作出定量测定。这一方法特异性、准确性高。但是此法除要加入待测酶ALT的底物外,还需要加入指示指示酶酶LDH及其辅酶及其辅酶NADH,又需用紫外分光光度计紫外分光光度
4、计,因此不易为一般临床化验室推广。答:答:丙氨酸+-酮戊二酸 ALT 谷氨酸+丙酮酸 丙酮酸+NADH 乳酸脱氢酶乳酸脱氢酶 乳酸+NAD+卡氏测定卡氏测定ALT活力的原理活力的原理小结小结:区别与联系区别与联系 实验原理:实验原理:知识链接:转氨基作用是一种是一种-氨基酸的氨基酸的-氨基转移到一种氨基转移到一种-酮酸上的过程。转氨酮酸上的过程。转氨基作用是氨基酸基作用是氨基酸脱氨基脱氨基作用的一种途径。其实可以看成是氨作用的一种途径。其实可以看成是氨基酸的氨基与基酸的氨基与-酮酸的酮基进行了交换酮酸的酮基进行了交换。作用作用:结果是生成了一种非必需氨基酸和一种新的:结果是生成了一种非必需氨基
5、酸和一种新的-酮酸。酮酸。碱性条件下,产物由黄色变为红棕色碱性条件下,产物由黄色变为红棕色知识链接:知识链接:2,4二硝基苯肼二硝基苯肼的性质的性质红色红色结晶性粉末结晶性粉末 分子量分子量 198.14 微溶微溶于水、乙醇,溶于酸于水、乙醇,溶于酸 对眼和皮肤有刺对眼和皮肤有刺激性。对皮肤有致敏性。本品吸收进入激性。对皮肤有致敏性。本品吸收进入体内,可引起高铁血红蛋白血症,出现体内,可引起高铁血红蛋白血症,出现紫绀紫绀 遇明火极易燃烧爆炸。干燥时遇明火极易燃烧爆炸。干燥时经震动、撞击会引起爆炸。燃烧时放出经震动、撞击会引起爆炸。燃烧时放出有毒的刺激性烟雾。与氧化剂混合能形有毒的刺激性烟雾。与
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