紫外-可见分光光度计的性能检验.ppt
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1、实验一实验一 紫外可见分光光度计紫外可见分光光度计的性能检验的性能检验 一、实验目的一、实验目的 1 1、掌握紫外可见分光光度计性能的检验方法、掌握紫外可见分光光度计性能的检验方法 2 2、学会、学会UV1100UV1100型紫外可见分光光度计的使用方法型紫外可见分光光度计的使用方法 二、实验原理二、实验原理 对分光光度计进行性能检查,以保证测定结果的准确。对分光光度计进行性能检查,以保证测定结果的准确。三三、仪器与试剂、仪器与试剂 UVUV11001100型紫外可见分光光度仪型紫外可见分光光度仪 石英比色皿(一对)石英比色皿(一对)擦镜纸擦镜纸 蒸馏水蒸馏水 6 6mg/100ml Kmg/
2、100ml K2 2CrCr2 2O O7 7溶液溶液 0.002 0.002mol/mol KMnOmol/mol KMnO4 4溶液溶液 四四、实验内容及操作步骤、实验内容及操作步骤 1 1、比色皿的配对性、比色皿的配对性注入注入蒸馏水蒸馏水两个比色皿两个比色皿分别分别440nm440nm以一个比色皿以一个比色皿为空白(为空白(T T1 1100100)测定测定另一个比色皿的另一个比色皿的T T2 2T=TT=T1 1-T-T2 2T0.5%T0.5%T0.5%两个比色皿配对两个比色皿配对两个比色不配对,应进行校正两个比色不配对,应进行校正 2 2、波长精度的检查、波长精度的检查以蒸馏水为
3、空白以蒸馏水为空白 测定测定KMnOKMnO4 4溶液的吸收曲线溶液的吸收曲线若测得的最大吸收波长在若测得的最大吸收波长在52515251nmnm以内以内说明说明仪器波长精度符合使用要求仪器波长精度符合使用要求5008000.40.2(nm)A0 3 3、重复性的检查、重复性的检查以以0.020.02mol/Lmol/L的的H H2 2SOSO4 4为空白为空白在在257257nmnm处处同一同一K K2 2CrCr2 2O O7 7溶液的溶液的T T,连续测定连续测定7 7次次测定测定求出极差求出极差 若极差若极差0.5%0.5%仪器的重复性符合仪器的重复性符合使用要求使用要求 4.4.吸收
4、吸收值值准确度准确度的检查的检查235nm235nm、257nm257nm分别测定分别测定 K K2 2CrCr2 2O O7 7溶液溶液吸光度吸光度并计算吸收系数并计算吸收系数以以0.020.02mol/Lmol/L的的H H2 2SOSO4 4为空白为空白(T T100%100%)313313nmnm、350nm350nm与下表规定的与下表规定的吸收系数比较吸收系数比较 若相对偏差在若相对偏差在1%1%以内以内说明说明仪器符合使用要求仪器符合使用要求波长波长/nmnm 吸收系数吸收系数 235235123.0123.0126.0126.0257257142.8142.8146.2146.2
5、31331347.047.050.350.3350350105.5105.5108.5108.5五、思考题五、思考题1 1、同种比色皿透光度的差异对测定有何影响?、同种比色皿透光度的差异对测定有何影响?2 2、检查分光光度计的重复性对测定有什么实际意义?、检查分光光度计的重复性对测定有什么实际意义?实验二实验二 吸收曲线的测绘及吸收曲线的测绘及吸收系数的测定吸收系数的测定 一、实验目的一、实验目的 1 1、掌握测绘吸收曲线的方法、掌握测绘吸收曲线的方法 2 2、学会测定吸收系数、学会测定吸收系数二、实验原理二、实验原理 1 1、若溶剂固定不变,化合物吸收曲线所出现的、若溶剂固定不变,化合物吸收
6、曲线所出现的maxmax、minmin或或(S(S)为一定值,且数目也一定,为鉴别化合物提为一定值,且数目也一定,为鉴别化合物提供了有力的证据。供了有力的证据。2 2、百分吸收系数是指当溶液浓度为、百分吸收系数是指当溶液浓度为1%1%,液层厚度为,液层厚度为1 1cmcm时的吸光度。时的吸光度。即即 三、仪器与试剂三、仪器与试剂 UVUV11001100型紫外可见分光光度计型紫外可见分光光度计 石英比色皿(一对)石英比色皿(一对)95%95%乙醇(乙醇(A.RA.R)0.005%0.005%丹皮酚对照品溶液丹皮酚对照品溶液四四、实验内容及操作步骤、实验内容及操作步骤丹皮酚对照品丹皮酚对照品10
7、10mgmg9595乙醇溶解乙醇溶解定容至定容至1010mlml摇匀摇匀精密吸取精密吸取5 5mlml置置100100mlml量瓶量瓶9595乙醇定容乙醇定容作为母液备用作为母液备用母液中丹皮酚的含量为母液中丹皮酚的含量为0.005%0.005%1 1、吸收曲线的测绘、吸收曲线的测绘精密吸取精密吸取母液母液1 1mlml置置1010mlml量瓶量瓶9595乙醇定容乙醇定容以以9595乙醇为空白,进行光谱扫描,得到吸收曲线图。乙醇为空白,进行光谱扫描,得到吸收曲线图。2 2、吸收曲线的测绘、吸收曲线的测绘 利用上述溶液,在利用上述溶液,在274274nmnm波长处测定其吸光度并计算波长处测定其吸
8、光度并计算百分吸收系数。百分吸收系数。实验三实验三 分光光度法测定槐花中分光光度法测定槐花中总黄酮的含量总黄酮的含量一、实验目的一、实验目的 1 1、掌握用标准曲线法测定槐花中总黄酮含量的方法、掌握用标准曲线法测定槐花中总黄酮含量的方法 2 2、巩固紫外可见分光光度计的操作方法、巩固紫外可见分光光度计的操作方法二、实验原理二、实验原理 黄酮类化合物分子中的羰基、羟基等结构可与金属盐黄酮类化合物分子中的羰基、羟基等结构可与金属盐类试剂如铝盐、铅盐等生成有色配合物,可用于定量分类试剂如铝盐、铅盐等生成有色配合物,可用于定量分析。析。三三、仪器与试剂、仪器与试剂 UVUV11001100型紫外可见分
9、光光度仪型紫外可见分光光度仪 石英比色皿(一对)石英比色皿(一对)5%5%NaNONaNO2 2溶液溶液 10%10%Al(NOAl(NO3 3)3 3溶液溶液 NaOHNaOH试液试液 芦丁对照品芦丁对照品 槐花药材槐花药材 其余试剂均为分析纯其余试剂均为分析纯;四四、实验内容及操作步骤、实验内容及操作步骤1 1、对照品溶液的制备、对照品溶液的制备加甲醇,水浴使溶解加甲醇,水浴使溶解芦丁对照品芦丁对照品5050mgmg置置2525mlml量瓶中量瓶中放冷,加甲醇至刻度,摇匀放冷,加甲醇至刻度,摇匀精密吸取精密吸取10ml10ml置置100100mlml量瓶中量瓶中加水至刻度,摇匀加水至刻度,
10、摇匀即得(每即得(每1 1mlml中含无水芦丁中含无水芦丁0.20.2mgmg)2 2、标准曲线的制备、标准曲线的制备精密量取对照品溶液精密量取对照品溶液0 0、1 1、2 2、3 3、4 4、5 5mlml分别置分别置2525mlml量瓶中量瓶中各加各加H H2 2O O加加5%NaNO5%NaNO2 2 1ml 1ml摇匀摇匀放置放置6 6minmin10%Al(NO10%Al(NO3 3)3 3 1ml 1ml摇匀摇匀放置放置6 6minmin加加加加NaOHNaOH试液试液 1010mlml加水至刻度加水至刻度摇匀,放置摇匀,放置1515minmin至至5 5mlml=500nm=50
11、0nm以相应试剂为空白以相应试剂为空白测定吸光度(测定吸光度(A A)以以吸光度吸光度为纵坐标,为纵坐标,浓度浓度为横坐标,绘制标准曲线为横坐标,绘制标准曲线吸吸光光度度浓度(浓度(mg/mlmg/ml)3 3、供试品溶液的制备、供试品溶液的制备槐花粗粉槐花粗粉1 1g g精密称定精密称定置置索氏提取器索氏提取器中中加加乙醚乙醚加热回流至加热回流至提取液无色提取液无色放冷放冷弃乙醚液弃乙醚液加加甲醇甲醇90ml90ml加热回流至加热回流至提取液无色提取液无色移至移至100100mlml量瓶中量瓶中甲醇少量多次洗涤容器甲醇少量多次洗涤容器洗液并入量瓶中洗液并入量瓶中加甲醇至刻度加甲醇至刻度摇匀摇
12、匀精密吸取精密吸取1010mlml置置100100mlml量瓶中量瓶中加水至刻度,摇匀加水至刻度,摇匀即得即得4 4、样品的测定、样品的测定精密吸取精密吸取供试品供试品溶液溶液3 3mlml置置2525mlml量瓶中量瓶中照标准曲线制备项下的方法照标准曲线制备项下的方法自自“加水至加水至5ml”5ml”起起从标准曲线上从标准曲线上求求出供试品溶液中芦丁的重量出供试品溶液中芦丁的重量,即得即得依法测定吸光度依法测定吸光度槐花中含总黄酮以无水芦丁(槐花中含总黄酮以无水芦丁(C C2727H H3030O O1616)计,)计,不得少于不得少于8.0%8.0%。五、注意事项五、注意事项 1 1、对照
13、品和样品应同时显色、对照品和样品应同时显色 2 2、显色剂加入的顺序、加入量和显色时间要正确、显色剂加入的顺序、加入量和显色时间要正确六、思考题六、思考题 1.1.分光光度法有哪些影响因素?分光光度法有哪些影响因素?2.2.试述标准曲线法的优点。试述标准曲线法的优点。实验四、薄层板的制备实验四、薄层板的制备一、实验目的一、实验目的掌握薄层板的制板方法。掌握薄层板的制板方法。二、仪器与试剂二、仪器与试剂天平(天平(0.1g)研钵研钵玻璃板玻璃板 10 cm20cm CMC-Na水溶液水溶液(3)蒸馏水蒸馏水 薄层层析用硅胶薄层层析用硅胶GF254(青岛海青岛海洋化工厂)洋化工厂)三、实验内容及操
14、作步骤三、实验内容及操作步骤 1.洗板洗板 选取板面平整的玻璃板,洗净后选取板面平整的玻璃板,洗净后放置在干净、平整的台面上,阴干备用。放置在干净、平整的台面上,阴干备用。2匀浆匀浆 将吸附剂将吸附剂1份(份(3.0g)和和水水3份在研钵中向同一方向研磨混合份在研钵中向同一方向研磨混合均匀。均匀。3 3铺制铺制 将已调制好的吸附剂匀浆倒至玻璃板的将已调制好的吸附剂匀浆倒至玻璃板的一端,用研棒将匀浆引到玻板的各个边缘,轻轻震一端,用研棒将匀浆引到玻板的各个边缘,轻轻震动,使吸附剂均匀铺开成一薄层。置水平台上阴干。动,使吸附剂均匀铺开成一薄层。置水平台上阴干。4 4活化活化 将阴干的薄层板至于将阴
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- 关 键 词:
- 紫外 可见 分光 光度计 性能 检验
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