紫外-可见分光光度计的性能检验课件.ppt
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1、实验一实验一 紫外可见分光光度计紫外可见分光光度计的性能检验的性能检验 一、实验目的一、实验目的 1 1、掌握紫外可见分光光度计性能的检验方法、掌握紫外可见分光光度计性能的检验方法 2 2、学会、学会UV1100UV1100型紫外可见分光光度计的使用方法型紫外可见分光光度计的使用方法 二、实验原理二、实验原理 对分光光度计进行性能检查,以保证测定结果的准确。对分光光度计进行性能检查,以保证测定结果的准确。三三、仪器与试剂、仪器与试剂 UV UV11001100型紫外可见分光光度仪型紫外可见分光光度仪 石英比色皿(一对)石英比色皿(一对)擦镜纸擦镜纸 蒸馏水蒸馏水 6mg/100ml K 6mg
2、/100ml K2 2CrCr2 2O O7 7溶液溶液 0.002mol/mol KMnO 0.002mol/mol KMnO4 4溶液溶液 2 2、波长精度的检查、波长精度的检查以蒸馏水为空白以蒸馏水为空白 测定测定KMnOKMnO4 4溶液的吸收曲线溶液的吸收曲线若测得的最大吸收波长在若测得的最大吸收波长在5251nm5251nm以内以内说明说明仪器波长精度符合使用要求仪器波长精度符合使用要求5008000.40.2(nm)A0 3 3、重复性的检查、重复性的检查以以0.02mol/L0.02mol/L的的H H2 2SOSO4 4为空白为空白在在257nm257nm处处同一同一K K2
3、 2CrCr2 2O O7 7溶液的溶液的T T,连续测定,连续测定7 7次次测定测定求出极差求出极差 若极差若极差0.5%0.5%仪器的重复性符合仪器的重复性符合使用要求使用要求 4.4.吸收值准确度的检查吸收值准确度的检查235nm235nm、257nm257nm分别测定分别测定 K K2 2CrCr2 2O O7 7溶液吸光度并计算吸收系数溶液吸光度并计算吸收系数以以0.02mol/L0.02mol/L的的H H2 2SOSO4 4为空白为空白(T(T100%100%)313nm313nm、350nm350nm与下表规定的与下表规定的吸收系数比较吸收系数比较 若相对偏差在若相对偏差在1%
4、1%以内以内说明说明仪器符合使用要求仪器符合使用要求波长波长/nm/nm 吸收系数吸收系数 235235123.0123.0126.0126.0257257142.8142.8146.2146.231331347.047.050.350.3350350105.5105.5108.5108.5实验二实验二 吸收曲线的测绘及吸收曲线的测绘及吸收系数的测定吸收系数的测定 三、仪器与试剂三、仪器与试剂 UVUV11001100型紫外可见分光光度计型紫外可见分光光度计 石英比色皿(一对)石英比色皿(一对)95%95%乙醇(乙醇(A.RA.R)0.005%0.005%丹皮酚对照品溶液丹皮酚对照品溶液1 1
5、、吸收曲线的测绘、吸收曲线的测绘精密吸取母液精密吸取母液1ml1ml置置10ml10ml量瓶量瓶9595乙醇定容乙醇定容以以9595乙醇为空白,进行光谱扫描,得到吸收曲线图。乙醇为空白,进行光谱扫描,得到吸收曲线图。2 2、吸收曲线的测绘、吸收曲线的测绘 利用上述溶液,在利用上述溶液,在274nm274nm波长处测定其吸光度并计算波长处测定其吸光度并计算百分吸收系数。百分吸收系数。实验三实验三 分光光度法测定槐花中分光光度法测定槐花中总黄酮的含量总黄酮的含量一、实验目的一、实验目的 1 1、掌握用标准曲线法测定槐花中总黄酮含量的方法、掌握用标准曲线法测定槐花中总黄酮含量的方法 2 2、巩固紫外
6、可见分光光度计的操作方法、巩固紫外可见分光光度计的操作方法二、实验原理二、实验原理 黄酮类化合物分子中的羰基、羟基等结构可与金属盐黄酮类化合物分子中的羰基、羟基等结构可与金属盐类试剂如铝盐、铅盐等生成有色配合物,可用于定量分类试剂如铝盐、铅盐等生成有色配合物,可用于定量分析。析。三三、仪器与试剂、仪器与试剂 UVUV11001100型紫外可见分光光度仪型紫外可见分光光度仪 石英比色皿(一对)石英比色皿(一对)5%NaNO5%NaNO2 2溶液溶液 10%Al(NO10%Al(NO3 3)3 3溶液溶液 NaOHNaOH试液试液 芦丁对照品芦丁对照品 槐花药材槐花药材 其余试剂均为分析纯其余试剂
7、均为分析纯;四四、实验内容及操作步骤、实验内容及操作步骤1 1、对照品溶液的制备、对照品溶液的制备加甲醇,水浴使溶解加甲醇,水浴使溶解芦丁对照品芦丁对照品50mg50mg置置25ml25ml量瓶中量瓶中放冷,加甲醇至刻度,摇匀放冷,加甲醇至刻度,摇匀精密吸取精密吸取10ml10ml置置100ml100ml量瓶中量瓶中加水至刻度,摇匀加水至刻度,摇匀即得(每即得(每1ml1ml中含无水芦丁中含无水芦丁0.2mg0.2mg)=500nm=500nm以相应试剂为空白以相应试剂为空白测定吸光度(测定吸光度(A A)以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线
8、吸吸光光度度浓度(浓度(mg/mlmg/ml)3 3、供试品溶液的制备、供试品溶液的制备槐花粗粉槐花粗粉1g1g精密称定精密称定置置索氏提取器中索氏提取器中加加乙醚乙醚加热回流至加热回流至提取液无色提取液无色放冷放冷弃乙醚液弃乙醚液加加甲醇甲醇90ml90ml加热回流至加热回流至提取液无色提取液无色移至移至100ml100ml量瓶中量瓶中甲醇少量多次洗涤容器甲醇少量多次洗涤容器洗液并入量瓶中洗液并入量瓶中加甲醇至刻度加甲醇至刻度摇匀摇匀精密吸取精密吸取10ml10ml置置100ml100ml量瓶中量瓶中加水至刻度,摇匀加水至刻度,摇匀即得即得五、注意事项五、注意事项 1 1、对照品和样品应同时
9、显色、对照品和样品应同时显色 2 2、显色剂加入的顺序、加入量和显色时间要正确、显色剂加入的顺序、加入量和显色时间要正确六、思考题六、思考题 1.1.分光光度法有哪些影响因素?分光光度法有哪些影响因素?2.2.试述标准曲线法的优点。试述标准曲线法的优点。实验四、薄层板的制备实验四、薄层板的制备二、仪器与试剂二、仪器与试剂天平(天平(0.1g)研钵研钵玻璃板玻璃板 10 cm20cm CMC-Na水溶液水溶液(3)蒸馏水蒸馏水 薄层层析用硅胶薄层层析用硅胶GF254(青岛海(青岛海洋化工厂)洋化工厂)三、实验内容及操作步骤三、实验内容及操作步骤 1.洗板洗板 选取板面平整的玻璃板,洗净后选取板面
10、平整的玻璃板,洗净后放置在干净、平整的台面上,阴干备用。放置在干净、平整的台面上,阴干备用。2匀浆匀浆 将吸附剂将吸附剂1份(份(3.0g)和)和水水3份在研钵中向同一方向研磨混合份在研钵中向同一方向研磨混合均匀。均匀。3 3铺制铺制 将已调制好的吸附剂匀浆倒至玻璃板的将已调制好的吸附剂匀浆倒至玻璃板的一端,用研棒将匀浆引到玻板的各个边缘,轻轻震一端,用研棒将匀浆引到玻板的各个边缘,轻轻震动,使吸附剂均匀铺开成一薄层。置水平台上阴干。动,使吸附剂均匀铺开成一薄层。置水平台上阴干。4 4活化活化 将阴干的薄层板至于将阴干的薄层板至于110110烘箱中活化烘箱中活化3030分钟,置于有干燥器中分钟
11、,置于有干燥器中备用。备用。实验五实验五 薄层色谱定性分薄层色谱定性分析析 (五味子的定性鉴别)(五味子的定性鉴别)一、实验目的一、实验目的 1.掌握薄层色谱的定性分析方法掌握薄层色谱的定性分析方法。2.熟悉薄层板的点样方法。熟悉薄层板的点样方法。二、实验原理二、实验原理 中药五味子中,五味子甲素为其主要有中药五味子中,五味子甲素为其主要有效成分之一,为了更好的进行定性鉴别,效成分之一,为了更好的进行定性鉴别,选用五味子甲素对照品和五味子对照药材选用五味子甲素对照品和五味子对照药材进行对照,根据相同的组分在相同的条件进行对照,根据相同的组分在相同的条件下,应该有相同的颜色和比移值来作为定下,应
12、该有相同的颜色和比移值来作为定性鉴别的依据。性鉴别的依据。五味子植株五味子植株五味子药材五味子药材三、仪器与试剂三、仪器与试剂定量毛细管定量毛细管已制备好的薄层板(硅胶已制备好的薄层板(硅胶GF254)展开缸展开缸 所用试剂均为分析纯所用试剂均为分析纯五味子粉末五味子粉末定量毛细管定量毛细管双槽展开缸双槽展开缸对对 照照 品品四、实验内容及操作步骤四、实验内容及操作步骤1.供试品液的制备:取五味子粉末供试品液的制备:取五味子粉末1g,加三氯甲烷,加三氯甲烷20ml,加热回,加热回流流30分钟,滤过,滤液蒸干,残分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加三氯甲烷渣加三氯甲烷1ml使溶解,作为使溶解,作为供试品
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