酶切回收连接.pptx
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1、会计学1酶切回收连接酶切回收连接质粒质粒DNA的酶切的酶切第1页/共21页定义:识别定义:识别定义:识别定义:识别dsDNAdsDNA的特异序列的特异序列的特异序列的特异序列,并在识别位点并在识别位点并在识别位点并在识别位点或其周围切割双链或其周围切割双链或其周围切割双链或其周围切割双链DNADNA的一类内切酶。的一类内切酶。的一类内切酶。的一类内切酶。限制性核酸内切酶第2页/共21页类内切酶作用特点类内切酶作用特点n n能在特殊位点识别和切断能在特殊位点识别和切断能在特殊位点识别和切断能在特殊位点识别和切断dsDNAdsDNA,识别序列,识别序列,识别序列,识别序列4-6bp4-6bp,具有
2、具有具有具有回文结构回文结构回文结构回文结构 (180180度旋转对称结构)度旋转对称结构)度旋转对称结构)度旋转对称结构)n nHinHind d n n产生产生产生产生5 5 粘性末端粘性末端粘性末端粘性末端A AGCTTA AGCTTTTCGA ATTCGA AAAGCTTAAGCTTTTCGAATTCGAA第3页/共21页n nSst GAGCTCGAGCTCCTCGAGCTCGAG产生3粘性末端GAGCT CGAGCT CC C TCGAGTCGAG粘端切口粘端切口第4页/共21页GTCCAGHinHind dGTCGACCAGCTGGACCTG+平端切口平端切口第5页/共21页第一
3、个字母取自产生该酶的细菌属名,用大写;第二、第三个字母是该细菌的种名,用小写;第四个字母代表株;用罗马数字表示发现的先后次序。3、命名:Hind Haemophilus influenzae d株 流感嗜血杆菌d株的第三种酶 属 系 株 序v书写方法:前3个字母斜体第6页/共21页酶活性单位酶活性单位n n指在限定条件下(温度、指在限定条件下(温度、指在限定条件下(温度、指在限定条件下(温度、BufferBuffer),),),),1hr1hr消化消化消化消化1ugDNA1ugDNA的酶量称为一个酶单位(的酶量称为一个酶单位(的酶量称为一个酶单位(的酶量称为一个酶单位(unitunit)。)。
4、)。)。n n实际工作中,为保证消化完全,实际工作中,为保证消化完全,实际工作中,为保证消化完全,实际工作中,为保证消化完全,1ugDNA1ugDNA的消化的消化的消化的消化需要需要需要需要3-53-5个单位的酶,反应时间也要适度延长,个单位的酶,反应时间也要适度延长,个单位的酶,反应时间也要适度延长,个单位的酶,反应时间也要适度延长,通常是反应过夜。通常是反应过夜。通常是反应过夜。通常是反应过夜。第7页/共21页酶切反应系统的设计酶切反应系统的设计n n回收回收回收回收DNADNA通常酶切通常酶切通常酶切通常酶切10g10gn n实际酶的用量应是理论用量的实际酶的用量应是理论用量的实际酶的用
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