血清总胆汁酸循环酶法测定法.doc
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1、血血清清总总胆胆汁汁酸酸循循环环酶酶法法 测测定定法法1 1. . 实实验验原原理理胆汁酸会被 3-羟甾醇脱氢( 3-HSD)以及 -硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸氧化型(Thio-NAD)特异性地氧化,生成 3-酮类固醇以及 -硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸还原型( Thio-NADH) 。此外生成的 3-酮类固醇在 3-羟甾醇脱氢( 3-HSD)及 -硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸还原型( Thio-NADH)存在下,生成胆汁酸及-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸氧化型( Thio-NAD) 。如上所述,依据循环酶而放大微量的胆汁酸量,测定单位时间内生成的-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸还原型(Thio-NADH)在 4
2、05nm处的吸光度变化,以求得胆汁酸的浓度。2 2. . 标标本本:2.1 病人准备:标本以空腹血清为宜,餐后胆汁酸会升高,应注意采血时间。2.2 类型:血清、肝素或EDTA 处理的血浆。应使用新鲜标本。标本必须避光保存。3 3. . 标标本本存存放放 4保存 可稳定 7 天, -20保存 可稳定 3个月。4 4. . 标标本本运运输输 常温条件下避光保存运输。5 5. . 标标本本拒拒收收标标准准 细菌污染的标本。6 6. . 实实验验材材料料6.1 试剂 威特曼总胆汁酸测定试剂盒(试剂1: 试剂2:)6.1.1 试剂准备:试剂为即用式。6.1.2 试剂稳定性与贮存:试剂避光保存于28,若无
3、污染,可稳定至失效期。试剂不可冰冻,试剂2 必须避光保存。6.1.3 变质指示:当试剂有看得见的微生物生长,有浊度,或者未开盖的液体有沉淀时,表明试剂已变质,不能继续使用。6.1.4 注意事项:不可入口!避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂6.2 校准品:使用威特曼公司提供的TBA 校准品对自动分析仪进行校准,具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。6.3 质控品:具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。7 7. . 仪仪器器 :奥林巴斯 AU2700 生化分析仪8 8. . 操操作作步步骤骤 : :8.1 项目基本参数:参见AU2700 生化分析仪项目测定参数.SOP
4、 文件8.2 仪器操作步骤:参见AU2700 生化分析仪操作规程 .SOP 文件9 9. . 检检验验结结果果的的判判断断与与分分析析1 10 0. . 质质量量控控制制: 在每一批标本中都应把非定值血清水平I 与 II 质控做为未知标本进行分析,以2S 为质控警告限,3S 为失控限,绘制质控图,判断是否在控。质控规则参见室内质控操作规程 .SOP 文件。1 11 1. . 计计算算方方法法: 以南京波因特公司提供的TBA 校准品校准仪器后,在病人结果可报告范围内,仪器直接报告可靠的检测结果,以mol/L 报告。1 12 2. . 参参考考值值范范围围2,3:成年人: 10mol/L参考值因性
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