蛋白 相关试剂.doc
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1、【精品文档】如有侵权,请联系网站删除,仅供学习与交流蛋白 相关试剂.精品文档.4牛血清蛋白(BSA)(10mg/ml)组份浓度 10mg/ml牛血清蛋白配制量 10ml配制方法 1.称量下列试剂。牛血清蛋白(组分V或分子生物学试剂级,无DNA酶)100mg 2.向15ml试管中加入9.5ml的去离子水。 3.把称好的试剂装入含9.5ml的去离子水的试管中,(为减少变性,须将蛋白加入水中,而不是将水加入蛋白)盖好盖后,轻轻摇动,直至牛血清蛋白完全溶解为止,不要涡旋混合。 4.加去离子水将溶液定容至10ml后,然后分装成小份贮存于-20。5二硫苏糖醇(DTT)(1mol/L)组份浓度 1mol/L
2、二硫苏糖醇配制量 32.4ml配制方法 1.称量下列试剂,置于100 ml烧杯中二硫苏糖醇5g 2.向100 ml烧杯中加入32.4ml水或0.01mol/L乙酸钠溶液(pH5.2),充分搅拌溶解。 3. 分成小份贮存于-20。注意事项:DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理。6苯甲基磺酰氟(PMSF)(100mmol/L)组份浓度 100mmol/L PMSF配制量 10ml配制方法 1.称量下列试剂,置于15ml试管中苯甲基磺酰氟174mg 2.向15ml试管中加入9.5ml异丙醇,充分搅拌溶解,定容到10ml。 3. 分成小份并用铝箔将装液管包裹 或贮存于-20。注意事项:PMSF严重
3、损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤,吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF,应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。PMSF在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快,且25的失活速率高于4。pH值为8.0时,20mmol/L PMSF水溶液的半寿期大约为85min,这表明将PMSF溶液调节 为碱性(pH8.6)并在室温放置数小时后,可安全地予以丢弃。7蛋白酶K(proteinase K)(20mg/ml)组份浓度 20mg/ml蛋白酶K配制量 10ml配制方法 1.称量下列试剂,置于15
4、ml试管中蛋白酶K200mg 2.向15ml试管中加入9.5ml水,轻轻摇动,直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml。 3. 分成小份贮存于-20。8过硫酸铵溶液(10%)组份浓度 10%过硫酸铵溶液配制量 10ml配制方法 1.称量下列试剂,置于15ml试管中过硫酸铵1g 2. .向15ml试管中加入9.5ml水,充分搅拌溶解,定容到10ml。 3. 可在4保存数周。9-巯基乙醇(BME)溶液组份浓度 14.4mol/L-巯基乙醇配制方法 一般得到的是14.4mol/L溶液,应装在棕色瓶中保存于4。注意事项:BME或含有BME的溶液不能高压处理。10十二烷基硫酸钠(SDS)溶
5、液(10%)组份浓度 10%十二烷基硫酸钠配制量 1L配制方法 1.称量下列试剂,置于l L烧杯中。十二烷基硫酸钠100g 2.向烧杯中加入约900 ml的去离子水,加热至68助溶。 3.加去离子水将溶液定容至l L后,分装备用。注意事项:SDS的微细晶粒易扩散,因此称量时要戴面罩,称量完毕后要清除残留在称量工作区和天平上的SDS,10% SDS溶液无须灭菌。11丙烯酰胺溶液(30%)组份浓度 30%丙烯酰胺配制量 100ml配制方法 1.称量下列试剂,置于100ml烧杯中。丙烯酰胺29gN,N-亚甲双丙烯酰胺1g 2.向烧杯中加入约60 ml的去离子水,加热至37溶解。 3.加去离子水将溶液
6、定容至100m后,用Nalgene滤器(0.45m孔径)过滤除菌,查证该溶液的pH值应不大于7.0,置棕色瓶中保存于室温。 注意事项:丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收,其作用具累积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒,但也应谨慎操作,因为它还可能会含有少量未聚合材料。一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子,在丙烯酰胺贮存液中加入大约0.2体积的单床混合树脂(MB-1 Mallinckrodt),搅拌过夜,然后用Whatman 1号滤纸过滤以纯化之。在贮存期间,丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸。12丙烯酰胺溶液(40%
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