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1、血清载脂蛋白A1APOA1测定1 检验目的 指导本室工作人员规范操作本检测项目,确保检测结果的准确。2 实验原理 血清中的ApoA1与试剂中特异性的ApoA1抗体结合,形成抗原抗体复合物而产生浊度,其浊度高低与血清中ApoA1成正比。通过测定特定波长的吸光度值,参照校准曲线即可计算出血清中ApoA1的含量。3标本:3.1 病人准备:应禁食12小时抽血。3.2 类型:血清3.3 标本存放 留取标本后请尽快分离血清。在冰箱保存的条件下(28)稳定3天,-20保存至少可以稳定3个月。3.4 标本运输 室温条件下运输。3.5 标本拒收标准 细菌污染的不能做测定。4 实验材料4.1 试剂:宁波美康生物科
2、技股份有限公司APOA1测定试剂盒(浙械注准20142400111)4.1.1 试剂组成 试剂1(R1): 磷酸盐缓冲液 0.1mol/L 聚乙二醇(PEG)表面活性剂,稳定剂 40g/L Triton X-100 0.1ml/L 试剂2(R2): 羊抗人APOA-血清(效价大于1:16) 5060ml/L4.1.2 试剂准备:试剂为即用式。4.1.3 试剂稳定性与贮存:试剂保存于28,若无污染,可稳定至失效期。试剂不可冰冻。缓冲液(R1)和抗体试剂(R2)可避光密封保存可稳定一年。打开后抗体试剂(R2)稳定2个月。4.1.4 变质指示:当试剂有看得见的微生物生长,有浊度,或者未开盖的液体有沉
3、淀时,表明试剂已变质,不能继续使用。4.1.5 注意事项:试剂中含叠氮钠(0.95g/L)为防腐剂。不可入口!避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂4.2 校准品:使用宁波美康生物科技有限公司提供的载脂蛋白A-/B标准品血清进行全点校准操作。4.3 质控品:使用正常值、病理值复合控制品。5 仪器 AU2700生化分析仪,罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪,东芝TBA-120生化分析仪。6 操作步骤6.1 样品的准备:将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。6.2 试剂的检测:仪器开机后,检查各种试剂的位置,体积等确认无误后方可进行测定。6.3 项目基本参数
4、:参见生化检验AU2700生化分析仪,罗氏P800生化分析仪,西门子ADVIA-2400生化分析仪,东芝TBA-120生化分析仪项目测定参数。6.4仪器操作步骤:参见生化检验AU2700生化分析仪,罗氏P800生化分析仪,西门子ADVIA-2400生化分析仪,东芝TBA-120生化分析仪操作规程。7 质量控制 在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析,以2S为质控警告限,3S为失控限,绘制质控图,判断是否在控。8 计算方法 以APO-A1复合校准品校准仪器后,在病人结果可报告范围内,仪器直接报告可靠的检测结果,以g/L报告。9 参考值范围 1.01.60g/L 我室的
5、参考值:1.0-1.70 g/L10 临床意义 载脂蛋白A1(ApoA1)是高密度脂蛋白(HDL)的主要结构蛋白,它可以去除细胞中的胆固醇,因此具有预防动脉粥样硬化的作用。流行病学研究表明以ApoA1表示的HDL水平与冠心病(CHD)的流行率呈负相关。在使用总胆固醇和甘油三酯来过筛冠心病危险时,除检测脂蛋白(a)与载脂蛋白B之外,同时检测载脂蛋白A1能对脂类失调提供更多的信息,也可替代高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)检测。一些研究表明,当Apo B浓度上升(女性Apo B1.50g/L,男性Apo B1.55g/L),而ApoA1浓度下降(女性Apo A11.20g/L,男性ApoA11.10
6、g/L),对于预测CHD危险非常有用。11 操作性能11.1 线性范围:0.302.6g/L(r20.995);11.2 精密度:精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法,AU1000批内精密度小于3%,总精密度小于3%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。11.3 方法学比较:本公司的试剂盒(y)与某商品化试剂盒(x),同时对53个样品进行Apo A1检测,将检测结果作方法学比较,其统计结果如下:y=1.15x-0.077g/L;r=0.994。11.4 灵敏度:本试剂的检测限为0.002g/L。12 超出范围结果处理 本法的检测范围为0.012.60g/L。当样品测定
7、值超过上限时,应将样品用9g/L氯化钠溶液作1:1稀释后,重新测定,结果乘以2。13 病危报警值的处理 无。14 方法局限性14.1 干扰物质:宁波美康公司的Apo A1试剂中抗体特异地只与人Apo A1发生免疫反应。当样品中抗坏血酸浓度1704 mmol/L,胆红素浓度598mmol/L,血红蛋白浓度5.00g/L,甘油三酯浓度22.6mmol/L时没有观察到干扰。试剂与ApoA2和ApoB没有交叉反应。14.2 前带限制:血清ApoA1值5.00g/L时,没有观察到前带效应。14.3 溶血标本可影响结果。15 补救措施 当仪器发生故障时,迅速联系仪器厂家进行维修。16 参考文献16.1叶应妩,王毓山,申子瑜主编全国临床检验操作规程中华人民共和国卫生部医政司编(第四版)16.2钱士匀主编.临床生物化学及生物化学检验实验指导.人民卫生出版社,2012年第5版16.3府伟灵,徐克前主编.临床生物化学检验.北京.人民卫生出版社,2012年第5版16.4试剂说明书。
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