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1、乙型肝炎病毒e抗体定量测定作业指导书1、 目的:规范乙型肝炎病毒e抗体测定的标准操作程序,确保乙型肝炎病毒e抗体 测定的结果准确有效。2、 适用范围:在AutoLumo A2000化学发光检测仪上定量测定人血清中的乙型肝炎病毒 e抗体。三、临床意义 乙型肝炎病毒(HBV)属嗜肝DNA病毒科, 具有明显的种属及嗜肝特性 (尽管其亦可感染肝以外的组织、器官或细胞,如脾、睾丸、人外周血单个 核细胞等),可致持续性病毒感染。HBV的感染导致血浆中出现特异性的乙 肝病毒e抗体及其它一系列特异性的血清学标志物。e抗体是乙型肝炎病毒 e抗体的简称(抗-HBe),它是由e抗原刺激人体免疫系统产生出来的特异 性
2、抗体,这种特异的e抗体能够和e抗原结合。四、方法原理 本产品采用竞争法原理进行检测。用e抗体和e抗原包被磁微粒,用辣 根过氧化物酶标记e抗体制备酶结合物。通过免疫反应形成抗体-抗原-酶标抗 体复合物,该复合物催化发光底物发出光子,发光强度与e抗体的含量成反 比。五、标本的采集与处理5.1.采用正确医用技术收集血清/血浆样本,推荐对于使用普通管采血的样 本,离心前样本应37孵育至少1h;对于使用促凝管采血的样本,离心 前样本应37孵育至少0.5h,离心条件10000g/min,10min;对于使用 抗凝管采血的样本,离心条件10000g/min,10min。抗凝管推荐使用肝 素钠作为抗凝剂,避免
3、使用枸橼酸钠和EDTA抗凝剂。5.2.样本中的沉淀物和悬浮物可能会影响试验结果,应离心除去,并确定样 本未变质方可使用。 5.3. 溶血或脂血的样本不能用于测定。5.4. 样本收集后在室温放置不可超过8小时;如果不在8小时内检测需将样 本放置在28的冰箱中;若需48小时以上保存或运输,则应冻存于 -20以下,避免反复冻融。使用前恢复到室温,轻轻摇动混匀。六、标本拒收标准 1)严重溶血、脂血 2)标本标识不明 七、仪器与材料 7.1.仪器:适用于AutoLumo A2000化学发光检测仪。 7.2.试剂:AutoLumo A2000专用乙型肝炎病毒e抗体试剂 7.2.1.试剂准备:本试剂为即用型
4、试剂,可以直接放在仪器上。 7.2.2.试剂盒于28储存,有效期12个月。 7.2.3.试剂盒应防止冷冻,避免强光照射。 7.2.4.试剂盒开启使用后,28保存可使用1个月。 7.2.5.试剂盒可适应1周内常温运输,运输过程中应轻拿轻放,避免重压,防止雨雪淋湿和阳光曝晒。 7.2.6.试剂机载稳定性 7.2.6.1. 试剂包(磁微粒混悬液、酶结合物)竖直向上存放, 在2 10C环境下冷藏保存2小时后,才可上机使 用。首次使用后,机载或在2 10C 环境下稳定期 为28天。 7.2.6.2.阴阳性对照开瓶后保存于28C,稳定期可维持1个 月;若需使用更长时间,应根据需要进行分装,于 -20冻存(
5、可以保存2个月),但应避免反复冻融。 7.2.6.3.试剂在2 8C保存可稳定至标签上所标示的有效 期。 7.3.质控液:推荐使用安图配套质控品或第三方质控品BioRAD QC八、检验方法 8.1.消耗品检查: 8.1.1.根据仪器说明装载或检查消耗品是否充足。 8.1.2.参考相应的仪器系统操作说明。 8.2.试剂包装载: 8.2.1.试剂包首次上机前,轻轻地倒转试剂包多次以混合新试剂包内的成 份,避免产生气泡。不要倒转已经打开的试剂包。 8.2.2.仪器通过扫描试剂包条码自动获取测试所需的参数。 8.2.3. 如果特殊情况下仪器无法识别条码,可以手工输入。 8.2.4.参考相应的仪器系统操
6、作说明。 8.3.测试: 8.3.1.将样本容器放置在仪器配套样本架中,每次测试样本量为50l。 8.3.2.装载样本架,在仪器软件界面中输入样本信息。 8.3.3.选择“运行”开始测试,系统自动进行试验操作。 8.3.4.参考相应的仪器系统操作说明。 8.4.定Cutoff值 8.4.1.仪器通过扫描条码卡自动获取测试所需的参数。 8.4.2.如果特殊情况下仪器无法识别条码卡,可以手工输入。 8.4.3.将阴阳性对照转移至样本容器,放置在仪器配套样本架中。 8.4.4.装载样本架,在仪器软件界面中输入Cutoff值信息。 8.4.5. 选择“运行”开始测试,生成Cutoff值。 8.4.6.
7、Cutoff值有效期为28天。 8.4.7.参考相应的仪器系统操作说明。 8.4.8.出现以下情况需要重新生成Cutoff值: 8.4.8.1.质控结果经重复测定后仍然超出范围; 8.4.8.2.试剂盒或发光底物液的批号更改; 8.4.8.3.超出Cutoff值有效期限; 8.4.8.4. 仪器重要部件更换或维修。 8.5.质控: 8.5.1.使用至少两个分析物水平的质控品进行质控。 8.5.2. 出现以下情况需要进行质控: 8.5.2.1.测试试剂盒使用超过24小时; 8.5.2.2.更换新的试剂盒; 8.5.2.3.重新生成Cutoff值; 8.5.2.4停机。 8.5.3.各实验室需根据
8、自身情况建立适合本实验室的可接受范围,以确 保合适的测试性能。 8.5.4.质控值应落在规定的范围内,如出现失控,应采取纠正措施。 8.6.结果计算: Cutoff值=阴性对照平均发光值*0.4 有效性判断: 8.6.1. 阴性对照孔平均发光值/阳性对照孔平均发光值大于3; 8.6.2.阴性对照各孔相对发光强度CV%不超过10%(如CV%超过 10%,则删除不平行点直到CV%小于10%或重新实验)。九、参考范围 S/CO=待测样本发光值/ Cutoff值; 当S/CO1.00时,结果判为阴性;S/CO1.00时,结果判为阳性。10、 检验结果的解释 10.1.用本试剂盒检测结果COI为0.80
9、1.20的弱反应性可疑样本,建议复 孔重新测定,如果双孔复查COI均大于1.00,结果判为阴性,如果单 孔或复孔测定不大于1.00,结果判为阳性,同时建议动态观察。 10.2.由于方法学或免疫特异性等原因,使用不同生产商的试剂对同一份样本 进行检测可能会得到不同的检测结果,因此不同试剂检测所得结果不应 直接相互比较,以免造成错误的医学解释,建议实验室在检测报告中注 明所用试剂特征。系列监测中,如果改变试剂类型,则应进行额外的连 续性检测并与原有试剂结果进行平行比较以重新确定基线值。十一、检验方法的局限性 11.1.本试剂盒仅作为诊断的辅助手段之一,临床诊断应与临床检查、病史 及其他检测相结合。
10、 11.2.样本中的异嗜性抗体或类风湿因子会干扰检测结果。此类样本不适 合用本试剂盒进行检测。 11.3.溶血、脂血或浑浊的样本可能会造成不正确的检测结果。 十二、产品性能特征 12.1. 符合率:与SFDA批准的试剂平行检测1024份临床样本,阴性符合率 98.98%,阳性符合率98.8%,总符合率98.93%。 12.2. 最低检出限:检定系列国家最低检出限参考品或经国家参考品标化的企 业最低检出限参考品,结果符合相应参考品的要求。 12.3. 精密性:10孔平行检测0.5 PEI U/ml样本,CV%10.0%;10孔平行 检测5 PEI U/ml样本,CV%20.0%。 12.4. 分
11、析特异性:与抗-HIV(1+2)、抗-HCV、抗-HAV等病毒性抗体无交 叉反应。1.25mg/ml血红蛋白、200mg/L胆红素、20g/L甘油三酯和 500mg/dl胆固醇对检测结果无干扰。 十三、参考文献 1.Lok ASE, McMahon BJ. AASLD practice guidelines:chronic hepatitis B. Hepatology, 2004, 34: 1225-1241. 2.Lavanchy D. Hepatitis B virus epidemiology, disease burden, treatment, and current and emerging prevention and control measures. J Viral Hepat, 2004, 11: 97-107. 3.巴德年,1998年.当代免疫学技术与应用.北京医科大学中国协和医科大学联 合出版社. 4.陶义训, 1997年第二版,免疫学与免疫学检验.人民卫生出版社. 5.中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会. 病毒性肝炎防治方案. 中华传染病杂志, 2001, 19:56-62.
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