多聚酶链式反应扩增片段新讲稿.ppt
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1、多聚酶链式反应扩增片段新第一页,讲稿共三十九页哦DNA指纹法在案件侦破中指纹法在案件侦破中有重要作用,刑侦人员通有重要作用,刑侦人员通过案发现场的血液、头发过案发现场的血液、头发等样品中提取的等样品中提取的DNA,与,与犯罪嫌疑人的犯罪嫌疑人的DNA进行比进行比较,就由可能为案件的侦较,就由可能为案件的侦破提供证据破提供证据。讨论:讨论:1.犯罪嫌疑人留在现场的样品一般都是极少量的,刑犯罪嫌疑人留在现场的样品一般都是极少量的,刑侦人员要怎样才能得到足够量的侦人员要怎样才能得到足够量的DNA呢?呢?2.你还能说出你还能说出DNA鉴定技术在其他方面的应用吗?鉴定技术在其他方面的应用吗?第二页,讲稿
2、共三十九页哦第三页,讲稿共三十九页哦第四页,讲稿共三十九页哦脱氧脱氧核糖核糖含氮碱基含氮碱基磷酸磷酸AG CTDNADNA的基本单位的基本单位12345O第五页,讲稿共三十九页哦鸟嘌呤脱氧核苷酸鸟嘌呤脱氧核苷酸胞嘧啶脱氧核苷酸胞嘧啶脱氧核苷酸 胸腺嘧啶脱氧核苷酸胸腺嘧啶脱氧核苷酸A腺嘌呤脱氧核苷酸腺嘌呤脱氧核苷酸GCT第六页,讲稿共三十九页哦第七页,讲稿共三十九页哦ATGCAGCT5端端3端端5端端3端端第八页,讲稿共三十九页哦ATGCAGCT5端端3端端5端端3端端 识别识别:-OH端为端为3;磷酸基团的磷酸基团的末端为末端为5。第九页,讲稿共三十九页哦第十页,讲稿共三十九页哦第十一页,讲稿
3、共三十九页哦2 2、时间:、时间:细胞分裂细胞分裂间期间期(有丝(有丝分裂间期分裂间期,减,减数第一次分裂的间期)数第一次分裂的间期)1 1、概念:、概念:以亲代以亲代DNA为模板,根据碱基互为模板,根据碱基互补配对合成子代在补配对合成子代在DNA的过程。的过程。3 3、场所:、场所:主要是细胞核主要是细胞核 (其次是线粒体、叶绿体)(其次是线粒体、叶绿体)二细胞内二细胞内DNADNA复制的过程复制的过程第十二页,讲稿共三十九页哦4 4、条件:条件:模板:模板:亲代亲代DNADNA的两条母链的两条母链 原料:原料:游离的四种脱氧核苷酸游离的四种脱氧核苷酸 能量:能量:ATPATP 酶:酶:解旋
4、酶解旋酶 、DNADNA聚合酶聚合酶 引物:一小段引物:一小段RNARNA,能与,能与DNADNA母链的一段碱基序列互补母链的一段碱基序列互补配对配对5 5、过程、过程(1)解旋:解旋酶)解旋:解旋酶、ATP(2)以)以DNA的两条母链为模板,根据碱基互补配的两条母链为模板,根据碱基互补配对规则,合成子链。对规则,合成子链。(3)子链、母链螺旋构成子代)子链、母链螺旋构成子代DNA第十三页,讲稿共三十九页哦6、复制特点半保留复制,边解旋边复制,多起点复制。半保留复制,边解旋边复制,多起点复制。7、DNA复制的方向DNA的合成方向总是从子链的的合成方向总是从子链的5端向端向3端延伸端延伸第十四页
5、,讲稿共三十九页哦第十五页,讲稿共三十九页哦第十六页,讲稿共三十九页哦第十七页,讲稿共三十九页哦解旋酶解旋酶DNADNA母链母链4 4种脱氧核苷酸种脱氧核苷酸DNADNA聚合酶聚合酶引物引物(RNA)打开打开DNADNA双链双链模板模板合成子链的原料合成子链的原料催化子链合成催化子链合成使使DNADNA聚合酶能从聚合酶能从引物引物3 3端开始连接端开始连接脱氧核苷酸脱氧核苷酸 思考:思考:体外扩增体外扩增DNADNA时,如何提供与体内时,如何提供与体内DNA复制相似条件?复制相似条件?变性变性(80100)Taq DNA聚合酶聚合酶(耐高温)(耐高温)2030个核苷酸构成个核苷酸构成DNA或或
6、RNA第十八页,讲稿共三十九页哦条件条件组分组分作用作用模板模板DNADNA的两条单链的两条单链提供复制的模板提供复制的模板原料原料四种脱氧核苷酸四种脱氧核苷酸 合成合成DNADNA子链的原料子链的原料酶酶解旋酶解旋酶TaqDNA聚合酶聚合酶不需要不需要催化合成催化合成DNADNA子链子链能量能量ATPATP不需要不需要引物引物一般是一小段一般是一小段DNADNA或或RNA,20-30RNA,20-30个核苷酸个核苷酸使使DNADNA聚合酶能够从引物聚合酶能够从引物的的3 3端开始连接脱氧核端开始连接脱氧核苷酸苷酸 (一)、(一)、PCRPCR的技术(的技术(DNADNA体外复制)的条件体外复
7、制)的条件第十九页,讲稿共三十九页哦DNA双链双链变性(加热变性(加热80-100)复性(缓慢冷却)复性(缓慢冷却)DNA单链单链变性的目的:变性的目的:解开双链解开双链复性的目的:复性的目的:有利于引物有利于引物1和引物和引物2与两条单链的与两条单链的结合结合第二十页,讲稿共三十九页哦PCR扩增仪实际上就是一台能够扩增仪实际上就是一台能够自动调控温度自动调控温度的仪器,它可以根据的仪器,它可以根据DNA的热变性原理的热变性原理,通,通过自动改变温度,达到扩增过自动改变温度,达到扩增DNA片段的目的片段的目的。第二十一页,讲稿共三十九页哦1234522557294时间(时间(minmin)温度
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