2018-2019学年高二生物北师大版选修1导学练课件:第2章 酶技术 2.2 酶活力的测定.ppt
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1、第2节酶活力的测定,1.记住酶活力的概念。2.阐明检测果胶酶活性的方法。3.探究温度、pH和酶浓度对果胶酶活性的影响。,一,二,三,一、酶活力单位为了表示酶活力的大小,人们规定了酶活力单位。在一定条件下,1 min内能转化1 mol底物的酶量称为一个酶活力单位。温度保持在25 ,其他条件如pH和底物浓度等均应采用最适条件。,一,二,三,二、检测果胶酶的活力1.原理果胶酶可将果胶分解生成-半乳糖醛酸,-半乳糖醛酸可用 次碘酸钠法进行定量测定。根据测定得到的-半乳糖醛酸的量可以计算出果胶酶的活力。2.方法步骤保温加碘氧化滴定计算。思考:酶活力的表示方法是什么?提示:用一定条件下酶所催化的某一化学反
2、应的反应速率来表示。,一,二,三,三、影响酶活性的因素绝大多数酶是有活性的蛋白质,酶活力测定就是对其所催化的化学反应速度的测定。酶对底物的作用是在一定环境条件下进行的,这些环境条件包括底物浓度、酶浓度、环境温度、环境pH、 激活剂和抑制剂等,所以影响酶活力的因素很多。,1.酶活力测定方法测定酶活力,可用物理法、化学法或酶分析法等方法。常用的方法:一是在适当的条件下,把酶和底物混合,测定生成一定量产物所需的时间,也称终点法;二是将酶和底物混合后隔一定时间,间断地或连续地测定反应的连续变化,如吸收度的增加或减少;三是将酶与底物混合后,让其反应一定时间,然后停止反应,定量测定底物减少或产物生成的量。
3、,2.测定酶活力时的注意事项(1)酶促反应过程中,只有最初一段时间内反应速度与酶浓度成正比,随着反应时间的延长,反应速度逐渐降低。(2)要规定一定的反应条件,如时间、温度、pH等,并在酶测定过程中保持这些反应条件的恒定,如温度不得超过规定温度的1 ,pH应恒定。(3)配制的底物浓度应准确且足够大,底物中应加入不抑制该酶活力的防腐剂并保存于冰箱中,以防止底物被分解。(4)标本要新鲜,由于绝大多数酶会因久置而活力降低,当标本无法及时测定时,应保存于冰箱中。(5)在测定过程中,所用仪器应绝对清洁,不应含有酶的抑制物,如酸、碱、蛋白沉淀剂等。,3.进行各因素对果胶酶活性的影响探究实验时需要注意的事项(
4、1)在探究温度或pH的影响时,需要设置对照实验,不同的温度梯度之间或不同的pH梯度之间可以作为对照,这种对照称为相互对照。只有在实验中保证一个自变量,实验结果才能说明问题。(2)在混合果泥和果胶酶之前,要将果泥和果胶酶分装在不同的试管中恒温处理。这样可以保证底物和酶在混合时的温度是相同的,避免了果泥和果胶酶混合时影响混合物的温度,从而影响果胶酶活性的问题。(3)在果胶酶处理果泥时,为了使果胶酶能充分地催化反应,应用玻璃棒不时搅拌。,题型一,题型二,酶活力的检测及影响酶活力的因素【例题1】 果胶是植物细胞壁以及胞间层的主要成分之一。果胶酶能够分解果胶,瓦解植物的细胞壁及胞间层。请完成以下有关果胶
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